Allegato 2
PREPARAZIONE DEGLI EMOCOMPONENTI E LORO CONSERVAZIONE
Emazie concentrate.
Le emazie concentrate senza ulteriori soluzioni additive, sono
ottenute da sangue intero attraverso la rimozione di parte del plasma
mediante centrifugazione, senza ulteriori lavorazioni.
Alla fine della procedura ciascuna unita' deve possedere:
contenuto minimo di emoglobina pari a 45 g;
ematocrito compreso tra 65 e 75%;
emolisi: meno dello 0,8% della massa di globuli rossi alla fine
del periodo massimo di conservazione.
Le emazie concentrate, preparate senza interruzione del circuito
chiuso, devono essere conservate a +4°C (+ o -) 2°C per un periodo di
tempo che dipende dal tipo di anticoagulante impiegato.
Emazie concentrate private del buffy-coat.
Le emazie concentrate private del buffy-coat sono ottenute da
sangue intero con la rimozione di parte del plasma e dello strato
leucopiastrinico (buffy-coat), pari ad un volume compreso tra 20 e 60
ml.
L'ematocrito del concentrato deve essere compreso tra il 65 ed il
75%.
L'unita' preparata deve contenere tutti gli eritrociti di
partenza meno una quota compresa tra 10 e 30 ml.
Emolisi: meno dello 0,8% della massa di globuli rossi alla fine
del periodo massimo di conservazione.
Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di leucociti
e di piastrine deve essere inferiore rispettivamente a 1,2x10(elevato
a 9) e a 20x10(elevato a 9) per unita', quello di emoglobina non
inferiore a 43 g.
La durata del periodo di conservazione del preparato e' analoga a
quella indicata per le emazie concentrate.
Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive.
Le emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive sono
ottenute da sangue intero, dopo centrifugazione e rimozione del
plasma e successiva aggiunta al concentrato eritrocitario di
appropriate soluzioni nutritive. Il volume della soluzione additiva
e' compreso tra 80 e 110 ml. La procedura deve essere effettuata
appena possibile dopo la raccolta (al massimo entro tre giorni).
L'ematocrito del preparato ottenuto, che dipende dalla metodica
di centrifugazione impiegata, dalla quantita' di plasma residuo;
dalle caratteristiche della soluzione additiva, non deve essere
superiore al 70%; ogni unita' deve avere un contenuto minimo di
emoglobina pari a 45g. Emolisi: meno dello 0,8% della massa di
globuli rossi alla fine del periodo massimo di conservazione.
L'unita' preparata deve possedere l'intero patrimonio eritrocitario
dell'unita' di partenza e deve contenere, sempreche' non siano stati
rimossi, la maggior parte dei leucociti e piastrine, in funzione del
metodo di centrifugazione impiegato. La durata del periodo di
conservazione del preparato e' in rapporto alla soluzione additiva
impiegata.
Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni
additive.
Le emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in
soluzioni additive sono ottenute da sangue intero centrifugato, dopo
rimozione del plasma e del buffy-coat e successiva addizione al
concentrato eritrocitario di opportune soluzioni nutritive. Il volume
della soluzione additiva e' compreso tra 80 e 110 ml. La procedura
deve essere effettuata appena possibile dopo la raccolta (al massimo
entro tre giorni).
L'ematocrito del preparato e' in diretto rapporto con il metodo
di centrifugazione adottato, con il volume di plasma residuo, con il
volume e le caratteristiche della soluzione additiva impiegata, non
deve essere superiore al 70%; ogni unita' deve avere un contenuto
minimo di emoglobina pari a 43 g. L'unita' preparata deve contenere
tutti gli eritrociti di partenza, meno una quota non superiore a
30 ml; il contenuto medio di leucociti e di piastrine per unita' deve
essere inferiore rispettivamente a 1,2x10(elevato a 9), e a
20x10(elevato a 9). Emolisi: meno dello 0,8% della massa di globuli
rossi alla fine del periodo massimo di conservazione.
La durata del periodo di conservazione del preparato e' in
rapporto alla soluzione impiegata.
Emazie lavate.
Le emazie lavate sono ottenute da sangue intero mediante
centrifugazione, rimozione del plasma e successivo lavaggio delle
emazie in soluzione isotonica a +4°C. Questo componente e' una
sospensione di eritrociti dalla quale sono stati rimossi leucociti e
piastrine e parte del plasma.
La quantita' di plasma residuo e' in diretto rapporto con il
protocollo di lavaggio impiegato. L'ematocrito varia in funzione
delle necessita' cliniche. Alla fine del procedimento di lavaggio
ciascuna unita' deve possedere un contenuto minimo di emoglobina pari
a 40 g.
Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di proteine
deve essere inferiore a 0,3 g/unita'.
Il preparato deve essere conservato a +4°C (+ o -) 2°C per un
periodo di tempo il piu' breve possibile e comunque non superiore a
ventiquattro ore se non vengono utilizzati metodi che garantiscono
l'integrita' del circuito chiuso.
Emazie leucodeplete.
Le emazie leucodeplete sono ottenute attraverso la rimozione,
mediante filtrazione, della maggior parte dei leucociti da una
preparazione di emazie o, al momento del prelievo, mediante filtro in
linea. Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di
leucociti deve essere inferiore a 1x10(elevato a 6) per unita'.
Ciascuna unita' deve possedere un contenuto minimo di emoglobina pari
a 40 g. Emolisi: meno dello 0,8% della massa di globuli rossi alla
fine del periodo massimo di conservazione.
Se la preparazione del prodotto ha comportato l'apertura del
sistema, il tempo di conservazione deve essere inferiore a
ventiquattro ore a 4°C (+ o - 9) 2°C.
Emazie congelate.
Le emazie congelate sono ottenute per congelamento con idoneo
crioprotettivo entro sette giorni dalla raccolta e conservate a
temperature comprese tra -60°C e -80°C in congelatore meccanico se si
utilizza un metodo con alta concentrazione di glicerolo, o a
temperature inferiori in azoto liquido se si utilizza un metodo con
bassa concentrazione di glicerolo. Per entrambi i metodi si richiede
una procedura di deglicerolizzazione/lavaggio. Le emazie congelate
possono essere conservate fino a dieci anni e il loro impiego a scopo
trasfusionale e' condizionato ai criteri di idoneita' previsti dalla
normativa in vigore e dalla garanzia che sia sempre mantenuta la
corretta temperatura di conservazione.
Prima dell'uso le emazie sono scongelate, deglicerolizzate,
lavate, risospese in soluzione fisiologica o soluzione additiva e
utilizzate nel piu' breve tempo possibile; possono essere conservate
a +4°C (+ o -) 2°C per non piu' di ventiquattro ore se non vengono
utilizzati metodi che garantiscono l'integrita' del circuito chiuso.
L'unita' ricostituita di emazie congelate e' praticamente priva
di proteine, granulociti e piastrine. Ogni unita' deve possedere un
contenuto emoglobinico non inferiore a 36 g.
Il trasporto del preparato allo stato congelato richiede misure
atte a mantenere adeguate condizioni di conservazione.
Concentrato di emazie da aferesi.
Il concentrato di emazie da aferesi e' ottenuto da un singolo
donatore sottoposto ad aferesi utilizzando un separatore cellulare ed
e' costituito da una o due unita'. Ogni unita' deve possedere un
contenuto minimo di emoglobina pari a 40 g, con un ematocrito del
65-75%, ridotto a 50-70% se risospeso in soluzione additiva. La
durata e le modalita' per la conservazione sono le medesime del
concentrato di emazie.
Concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero.
Il concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero e'
ottenuto da sangue intero fresco mantenuto a + 22 (+ o -) 2°C,
attraverso centrifugazione e successivo recupero della maggior parte
del contenuto in piastrine.
Ad un controllo di qualita' a campione, il preparato deve
contenere, nel 75% delle unita' esaminate, un numero di piastrine
compreso tra le 4,5 e le 8,5x10(elevato a 10) in 50-60 ml del mezzo
di sospensione.
Il preparato deve possedere, per singola unita', un contenuto di
leucociti inferiore a 0,2x10(elevato a 9), se da plasma ricco di
piastrine, o inferiore a 0,05x10(elevato a 9), se da buffy-coat,
sempreche' non siano state adottate misure volte a diminuire il
contenuto dei componenti predetti.
Il concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero,
qualora preparato in sistema chiuso, puo' essere conservato a 22°C (+
o -) 2°C, in agitazione continua, per un periodo di tempo variabile
in funzione del contenitore impiegato e comunque non oltre cinque
giorni dal prelievo. La conservazione deve essere effettuata con
modalita' che garantiscano la vitalita' e l'attivita' emostatica
delle piastrine contenute. Il volume di plasma o di liquido
conservante deve essere in quantita' tale da garantire, durante tutto
il periodo di conservazione, un pH compreso fra 6,4 e 7,4, corretto
per 22°C.
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat.
Il concentrato piastrinico da pool di buffy-coat e' ottenuto da
un pool di 5-8 buffy-coat da singole unita' di sangue intero fresco e
deve contenere almeno 2,5x10(elevato a 11) piastrine.
La miscela di buffy-coat, compatibile per gruppo sanguigno, deve
essere quindi diluita con una adeguata quantita' di plasma o con
appropriata soluzione nutriente e centrifugata in modo da ridurre il
contenuto di leucociti ad una quantita' inferiore a 0,05x10(elevato a
9) per singola unita' di partenza.
Il valore di pH e la temperatura di conservazione sono quelli
previsti per i concentrati piastrinici.
La durata del periodo di conservazione dipende dal contenitore
impiegato. La conservazione deve essere effettuata con modalita' che
garantiscano la vitalita' e l'attivita' emostatica delle piastrine
contenute.
Si possono preparare concentrati piastrinici lavati per pazienti
con ripetute reazioni dopo trasfusione di piastrine o in pazienti con
anticorpi anti -IgA, se non sono disponibili piastrine da donatori
con carenza di IgA. I lavaggi comportano la riduzione proteica, ma
contemporaneamente diminuisce il contenuto piastrinico. Le piastrine
devono poi essere risospese in una soluzione additiva.
Concentrato piastrinico da aferesi.
Il concentrato piastrmnico da aferesi e' ottenuto da un singolo
donatore sottoposto a piastrinoaferesi utilizzando un separatore
cellulare.
Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di piastrine
del concentrato non deve essere inferiore a 3x10(elevato a 11)
piastrine in almeno il 75% dei campioni.
Il concentrato ottenuto da plasmapiastrinoaferesi o da prelievo
multicomponente deve contenere almeno 2x10(elevato a 11) piastrine.
L'emocomponente, se preparato in sistema chiuso, puo' essere
conservato a 22°C (+ o -) 2 °C in agitazione continua per un periodo
di tempo variabile in funzione del contenitore impiegato, e comunque
non superiore a cinque giorni dal prelievo. La conservazione deve
essere effettuata con modalita' che garantiscano la vitalita' e
l'attivita' emostatica delle piastrine contenute.
Il volume di plasma o di liquido conservante deve essere in
quantita' tale da garantire, durante tutto il periodo di
conservazione, un pH compreso fra 6,4 e 7,4.
Si possono preparare concentrati piastrinici lavati per pazienti
con ripetute reazioni dopo trasfusione di piastrine o in pazienti con
anticorpi anti -IgA, se non sono disponibili piastrine da donatori
con carenza di IgA. I lavaggi comportano la riduzione proteica, ma
contemporaneamente diminuisce il contenuto piastrinico. Le piastrine
devono poi essere risospese in una soluzione additiva.
Piastrine crioconservate (da aferesi).
Le piastrine crioconservate (da aferesi) sono preparate
congelando a -80°C, o a temperature inferiori, un concentrato di
piastrine prelevate in aferesi da non piu' di ventiquattro ore.
Il preparato puo' essere conservato in congelatore meccanico a
-80°C fino ad un anno, in vapori di azoto liquido a -150°C, fino a
dieci anni. E' necessario utilizzare un crioprotettivo.
Prima dell'uso le piastrine devono essere scongelate e risospese
in appropriata soluzione. Dopo scongelamento devono essere usate
immediatamente. Il caso di breve periodo di conservazione vanno
mantenute in adeguata agitazione a +22°C (+ o -) 2°C.
Una unita' ricostituita di piastrine crioconservate deve avere:
volume da 50 a 200 ml, conta piastrinica maggiore del 40% del
contenuto piastrinico prima del congelamento, leucociti residui
inferiori a 1x10(elevato a 6).
Per il trasporto allo stato congelato devono essere adottate
misure volte a mantenere adeguate condizioni di conservazione.
Concentrato granulocitario da aferesi.
Il concentrato granulocitario da aferesi sospeso in plasma e'
ottenuto da un singolo donatore mediante l'impiego di separatori
cellulari.
Ad un controllo di qualita' a campione, il preparato deve
contenere almeno 1x10(elevato a 10) granulociti in un volume
inferiore a 500 ml in almeno il 75% delle unita' esaminate.
La preparazione deve essere trasfusa quanto prima possibile e
comunque entro ventiquattro ore se mantenuta a 22°C (+ o -) 2°C.
Cellule staminali emopoietiche periferiche.
Le cellule staminali da sangue periferico vengono raccolte come
cellule mononucleate mediante leucoaferesi.
Le cellule staminali da cordone ombelicale vengono raccolte dalla
placenta attraverso le vene del cordone ombelicale.
Quando indicate, successive addizionali purificazioni e
manipolazioni possono comprendere: la rimozione di granulociti ed
eritrociti nonche' la riduzione ed eliminazione di cellule
neoplastiche nelle preparazioni di cellule progenitrici
ematopoietiche autologhe o del numero dei T - linfociti nelle
preparazioni di cellule progenitrici ematopoietiche allogeniche, al
fine di minimizzare la Graft versus Host Disease (GvHD).
Le cellule raccolte vengono sospese in una soluzione contenente
un crioprotettivo e proteine, congelate in idonei contenitori e poi
conservate a temperature inferiori a -80°C.
Le cellule progenitrici ematopoietiche congelate debbono essere
scongelate in bagno termostatico a +37°C, sotto agitazione continua,
e trasfuse immediatamente.
Debbono essere congelati anche i campioni di riferimento delle
preparazioni di cellule progenitrici ematopoietiche per i dovuti
controlli.
Plasma fresco congelato.
ll plasma fresco congelato (P.F.C.) e' ottenuto attraverso il
congelamento di plasma, dopo separazione del sangue intero o mediante
aferesi (plasmaferesi), che deve avvenire entro limiti di tempo e a
temperature tali da preservare adeguatamente l'attivita' dei fattori
labili della coagulazione. Tale preparazione contiene normali livelli
di fattori stabili e labili della coagulazione, albumina e
immunoglobuline, per una quantita' totale di proteine superiore a 50
g/L.
Il preparato dovrebbe contenere meno di 6x10(elevato a 9/l) di
emazie, meno di 0,1x10(elevato a 9/l) di leucociti e meno di
50x10(elevato a 9/l) di piastrine.
Qualora il plasma sia ottenuto da sangue intero deve essere
separato preferenzialmente entro sei ore e non oltre le 18 ore dalla
raccolta ed il suo congelamento deve avvenire utilizzando una
apparecchiatura che lo completi entro un'ora a temperatura inferiore
a -30°C.
Qualora il plasma sia ottenuto da aferesi, deve essere congelato
utilizzando una apparecchiatura che lo completi entro un'ora a
temperatura inferiore a -30°C.
Ad un controllo di qualita' a campione, il preparato deve
contenere almeno il 70% del contenuto originale di fattore VIIIc.
Il plasma fresco congelato, se mantenuto costantemente a
temperatura inferiore a -25°C puo' essere conservato fino a
ventiquattro mesi, se a temperaura compresa tra -18 e -25°C fino a
tre mesi. Trascorsi i periodi anzidetti il preparato e' utilizzabile
solo per la produzione di frazioni plasmatiche. Lo scongelamento del
PFC deve avvenire a temperatura compresa tra 30°C e 37°C in bagno con
agitazione o con altra strumentazione idonea, tale da consentire il
controllo della temperatura; dopo lo scongelamento deve essere usato
il piu' presto possibile e comunque non oltre ventiquattro ore se
conservato a +2°C (+ o - ) 2°C e non puo' essere ricongelato.
In rapporto all'eventuale applicazione di trattamenti virucidi
possono essere accettate caratteristiche finali del prodotto diverse
purche' in accordo con i criteri internazionalmente riconosciuti
validi.
Il plasma fresco congelato non deve contenere anticorpi
irregolari clinicamente significativi.
Crioprecipitato e plasma privo di crioprecipitato.
Il crioprecipitato e' un preparato costituito dalla frazione
crioglobulinica del plasma fresco, ottenuta da una singola donazione,
concentrato ad un volume finale di non superiore a 40 ml. Il prodotto
contiene, oltre al fattore VIII, anche la maggior parte del fattore
Von Willebrand, del fibrinogeno, del fattore XIII e della
fibronectina, presenti nel plasma fresco di partenza.
Ad un controllo di qualita' a campione, il preparato deve
contenere piu' di 70 U.I. di Fattore VIIIc, piu' di 140 mg di
fibrinogeno e piu' di 100 UI di Fattore Von Willebrand. Le condizioni
di conservazione sono quelle del PFC.
Il plasma privo di crioprecipitato e' costituito da plasma fresco
congelato dopo rimozione del crioprecipitato. Contiene albumina,
immunoglobuline e fattori della coagulazione nella stessa quantita'
del plasma fresco congelato, eccetto i livelli di FV, FVIII, che sono
ridotti marcatamente e fibrinogeno ugualmente ridotti.
Le condizioni di conservazione sono quelle del PFC. Lo
scongelamento immediatamente prima dell'uso deve seguire le modalita'
indicate per il plasma fresco congelato.
Il plasma privo di crioprecipitato non deve contenere anticorpi
irregolari clinicamente significativi.
Emocomponenti irradiati.
Le unita' di sangue ed emocomponenti, nel casosia indicata
l'irradiazione, devono essere sottoposte a una dose di radiazioni
compresa tra 25 Gray e 50 Gray, allo scopo di ridurre il rischio di
GvHD post-trasfusionale. Il tempo di esposizione deve essere
standardizzato per ogni apparecchio emittente ed aggiustato ad
intervalli regolari per tener conto del decadimento dell'isotopo.
L'irradiazione delle emazie deve avvenire entro quattordici
giorni dal prelievo e le unita' iradiate debbono essere trasfuse
entro ventotto giorni dal prelievo.
Nei casi di trasfusione intrauterina, o a neonato, o a paziente
con iperpotassiemia e' necessario procedere alla trasfusione entro
quarantotto ore dall'irradiazione, oppure provvedere
all'eliminazione, con mezzi idonei, dell'eccesso di potassio.
L'irradiazione non modifica la scadenza dei concentrati
piastrinici.
Le unita' di sangue ed emocomponenti irradiate possono essere
assegnate anche a pazienti immunologicamente normali, fatte salve le
dovute precauzioni per categorie a rischio di iperpotassiemia.
La irradiazione degli emocomponenti deve avvenire in locali
conformi alle norme di sicurezza.
Unita' di predeposito per autotrasfusione.
L'unita' di predeposito per autotrasfusione consiste in una
unita' di sangue intero e/o di emocomponenti prelevata al paziente
cui e' destinata per corrispondere a proprie esigenze terapeutiche.
Il preparato e' di esclusivo uso autologo pertanto non e'
soggetto ai vincoli imposti dai protocolli per l'accertamento della
idoneita' del donatore di sangue.
Il responsabile della struttura trasfusionale adotta il
protocollo per la procedura operativa del predeposito in cui viene
definita anche la modalita' di acquisizione del consenso informato
del paziente.
Piu' unita' di sangue intero e/o di emocomponenti, in funzione
delle esigenze terapeutiche, possono essere prelevate dal paziente a
brevi intervalli di tempo, secondo le procedure adottate nella
struttura trasfusionale e con l'eventuale supporto farmacologico, e
predepositate.
L'unita' di predeposito deve essere identificata in maniera
univoca, sulla etichetta della relativa sacca deve essere apposta la
firma del paziente e del medico responsabile del prelievo. Per ogni
unita' devono essere effettuate le seguenti indagini:
gruppo AB0 ed Rh (D);
HbsAg;
HCVAb;
HIV(base1-2)Ab.
Il paziente deve essere informato che le unita' predepositate
sono conservate fino a scadenza della componente eritrocitaria e che
sono disponibili per le sue necessita' trasfusionali.
La scadenza dell'unita' di predeposito, le relative modalita' di
conservazione e di trasporto sono analoghe a quelle per le unita'
allogeniche.
Emocomponenti per uso non trasfusionale (topico).
Gel piastrinico.
Il gel piastrinico e' un emocomponente per uso topico, di origine
autologa od allogenica, ottenuto dall'aggregazione di un concentrato
piastrinico messo a contatto con calcio e fattori proaggreganti
biologici (trombina) o farmacologica. Nel corso del processo di
formazione del coagulo le piastrine liberano i fattori contenuti
negli alpha granuli. L'uso topico del preparato, favorito dalle sue
caratteristiche di plasticita' e modellabilita' alla sede di
applicazione, favorisce ed accelera la riparazione tissutale sia
cutanea sia ossea. Trova il maggior impiego nella chirurgia maxillo -
facciale, ortopedica e nella cura delle ulcere torpide cutanee.
Il preparato puo' essere ottenuto da sangue intero da predeposito
o da donazione allogenica per frazionamento, con o senza reinfusione
delle emazie, o da piastrinoaferesi antologa o allogenica.
Tutto il processo deve avvenire garantendo l'asepsi. Dopo la
preparazione va utilizzato il piu' rapidamente possibile, oppure
congelato secondo tempi e modalita' analoghi a quelli del PFC. In
caso di origine allogenica devono essere eseguiti gli esami
obbligatori per la validazione biologica.
Colla di fibrina.
La colla di fibrina e' un emocomponente per uso topico, di
origine autologa od allogenica. Il suo uso topico, facilita
l'adesione tissutale, favorisce l'emostasi, coadiuva le suture
chirurgiche nel processo di cicatrizzazione. Trova il maggior impiego
nella chirurgia cardiovascolare, toracica ed epatica, ma anche in
neurochirurgia e in chirurgia plastica. Il preparato e' ottenuto dal
plasma di origine autologa od allogenica, attraverso una procedura
che garantisca l'asepsi. Dopo la preparazione va utilizzato il piu'
rapidamente possibile, oppure congelato secondo tempi e modalita'
analoghi a quelli del PFC. In caso di origine allogenica devono
essere eseguiti gli esami obbligatori per la validazione biologica.