ALLEGATO
NORME RELATIVE ALLA PRODUZIONE, AL CONTROLLO E ALLA CONSERVAZIONE
DEL VACCINO VIVO, ATTENUATO, CONTRO LA VARICELLA.
Il vaccino vivo contro la varicella e' costituito da un preparato
liofilo ottenuto dal ceppo attenuato OKA di Herpes virus varicellae
propagato in colture di cellule diploidi umane.
Il vaccino ricostituito immediatamente prima dell'uso, con apposito
solvente, ha l'aspetto di un liquido limpido e incolore (se contiene
un indicatore di pH, puo' apparire opportunamente colorato).
1. Preparazione.
La produzione del vaccino viene effettuata partendo da un lotto di
semenza virale derivato da un ceppo virale caratterizzato dal punto
di vista biologico e clinico, e da una banca di cellule di un
determinato ceppo cellulare sulla cui origine e successive
manipolazioni deve essere fornita documentazione all'Istituto
superiore di sanita'.
Il virus proveniente dalla semenza virale puo' essere propagato per
ottenere una o piu' raccolte virali da cui preparare un "bulk"
destinato alla costituzione dei lotti finali.
1.1. Substrato per la moltiplicazione del virus.
Il ceppo cellulare, costituito da cellule diploidi umane, e la
banca di cellule devono essere approvati dall'Istituto superiore di
sanita' e devono essere caratterizzati per origine, identita'
(isoenzimi, sierologia, fingerprinting degli acidi nucleici),
marcatori genetici (HLA), cariotipo, caratteristiche di crescita,
caratteristiche morfologiche e vitalita' durante il congelamento
secondo le norme della Farmacopea europea e della Farmacopea
ufficiale italiana.
Il ceppo cellulare deve risultare adatto alla crescita virale. Le
cellule devono risultare, in saggi effettuati in vivo, esenti da
contaminanti virali avventizi e libere da eterotrasplantabilita'. Le
colture cellulari devono, inoltre, corrispondere ai requisiti di
sterilita' batterica e micotica e di assenza di micoplasmi. Anche i
liquidi di coltura delle cellule devono essere saggiati, per definire
l'assenza di agenti estranei.
Tutti i saggi sopradescritti devono essere svolti in conformita'
alla Farmacopea europea e alla Farmacopea ufficiale italiana.
Deve essere fornita documentazione comprovante che il siero fetale
bovino, usato come fattore di crescita delle colture cellulari,
corrisponda ai requisiti di sterilita' batterica e micotica e assenza
di micoplasmi e di virus bovini.
1.2. Lotto di semenza virale.
La sospensione di semenza virale, impiegata nella produzione, deve
provenire dal ceppo OKA del virus della varicella, la sua origine e i
successivi passaggi devono essere documentati.
Il virus non dovra' in nessun caso aver subito passaggi in linee
continue di cellule e dovra' trovarsi ad un numero di passaggio tale
che il prodotto finito non debba mai superare il 38 . I lotti di
semenza virale devono essere propagati nello stesso tipo di cellule
utilizzate per la produzione del vaccino finale. I lotti di semenza
virale devono essere conservati a temperatura inferiore a --20 C se
sono liofilizzati o inferiore a --60 C se non lo sono. La
propagazione del virus deve effettuarsi con le dovute precauzioni di
asepsi in cellule umane diploidi approvate per l'impiego nella
produzione dei vaccini. Soltanto i lotti di semenza virale che
risultino controllati con risultati soddisfacenti per quanto riguarda
la concentrazione virale, l'identita', l'assenza di agenti estranei e
la neurovirulenza possono essere utilizzati per la produzione del
virus. Tutti i saggi sopraindicati devono essere svolti in modo
conforme alle norme della Farmacopea europea e della Farmacopea
ufficiale italiana.
1.3. Moltiplicazione e raccolta del virus.
Il virus proveniente dal lotto di semenza virale puo' essere
propagato per ottenere delle singole raccolte virali da utilizzare
per la preparazione della raccolta finale (bulk). Ogni singola
raccolta di virus deve essere sottoposta a controllo.
Possono essere considerate singole raccolte di sospensione virale
una o piu' raccolte mescolate, derivanti dalla stessa produzione di
cellule.
Il siero di origine animale, usato come fattore di crescita delle
colture cellulari, deve essere stato approvato. Non puo' essere
utilizzato siero di origine umana. Il siero stesso e la tripsina,
usati nella preparazione, devono risultare esenti da agenti estranei.
L'indicatore di pH (rosso fenolo) e gli antibiotici consentiti devono
essere utizzzati alla concentrazione minima efficace.
Il 5% (e non meno di 50 ml) delle colture cellulari utilizzate deve
essere conservato come coltura cellulare di controllo non infettata e
deve risultare conforme alle norme relative alla presenza di agenti
estranei indicate nella Farmacopea europea e nella Farmacopea
ufficiale italiana.
Le cellule infettate provenienti da una stessa raccolta devono
essere lavate, staccate dalla superficie del supporto e mescolate. La
sospensione cellulare deve essere lisata tramite trattamento con
ultrasuoni.
Sulle singole raccolte di sospensione virale, prima della
chiarificazione, dovranno essere effettuate le seguenti prove:
identita'. La prova di identita' dovra' essere effettuata con un
saggio di sieroneutralizzazione su colture cellulari, per mezzo di
anticorpi specifici, secondo le norme della Farmacopea europea e
della Farmacopea ufficiale italiana;
assenza di agenti estranei. Il saggio per valutare l'assenza di
agenti estranei dovra' essere svolto secondo le norme della
Farmacopea europea e della Farmacopea ufficiale italiana;
concentrazione virale. Il saggio per valutare la concentrazione
virale ha la finalita' di mostrare le regolarita' della produzione e
di determinare la diluizione da utilizzare nella preparazione del
lotto finale e dovra' essere svolto secondo le norme della Farmacopea
europea e della Farmacopea ufficiale italiana.
1.4. Sospensione madre (bulk) finale.
La sospensione madre finale puo' essere costituita da una miscela
di singole raccolte purche' queste risultino soddisfacenti ai
controlli di identita', assenza di agenti estranei e concentrazione
virale sopradescritti. Il preparato deve essere chiarificato per
eliminare ogni detrito cellulare e puo' essere addizionato di un
appropriato stabilizzante e diluito in modo conveniente.
La sospensione virale, dopo chiarificazione, deve presentare
requisiti soddisfacenti per quanto concerne l'assenza di
microrganismi contaminanti.
Controllo di assenza di microrganismi contaminanti (saggio di
sterilita' batterica e micotica). Il saggio deve essere svolto in
conformita' alla Farmacopea europea e alla Farmacopea ufficiale
italiana.
1.5. Lotto finale.
Il preparato virale finale (bulk) deve essere aliquotato
asetticamente in recipienti sterili a chiusura ermetica e
liofilizzato fino a che il contenuto di acqua, che non deve essere
superiore al 3,0%, sia tale da consentire una buona stabilita' al
vaccino.
Al termine della liofilizzazione il recipiente deve essere chiuso
ermeticamente.
Sul prodotto finito ed infialato devono essere fatti i seguenti
controlli:
identita'. Il vaccino ricostituito in modo appropriato, mescolato
con anticorpi specifici contro Herpes virus varicellae, non deve
essere in grado di infettare colture cellulari suscettibili;
concentrazione virale. Deve essere valutata con un saggio di
titolazione su almeno 10 colture cellulari per ogni diluizione in
ragione di 4 o con una tecnica di precisione equivalente. Il titolo
virale va comparato con quello di un preparato di riferimento
appropriato. In ogni caso la concentrazione del virus non deve
risultare inferiore a 2,0X10 UFP per dose;
sterilita'. Il vaccino ricostituito deve soddisfare i requisiti di
sterilita' batterica e micotica conformi alle regole della Farmacopea
europea e della Farmacopea ufficiale italiana;
contenuto di siero albumina bovina (BSA). La determinazione del
contenuto di siero albumina bovina deve essere eseguita secondo le
indicazioni della Farmacopea europea e della Farmacopea ufficiale
italiana e, in ogni caso, non deve superare la concentrazione di 0,5
g/dose umana. Tale saggio puo' essere evitato se eseguito sulla
sospensione madre finale con risultati soddisfacenti;
contenuto di acqua. Non deve essere superiore al 3,0%.
2. Conservazione e data di scadenza.
Le condizioni di conservazione devono essere conformi alle norme
della Farmacopea europea e della Farmacopea ufficiale italiana
relative ai vaccini per uso umano.
La data di scadenza del vaccino sara' stabilita sulla base delle
prove di stabilita' fornite dalla ditta produttrice del vaccino.
3. Etichette.
Oltre alle indicazioni di cui alla monografia "Vaccini per uso
umano" (Farmacopea europea e Farmacopea ufficiale italiana),
l'etichetta sul recipiente o sull'imballaggio deve riportare:
il ceppo virale utilizzato per la preparazione del vaccino;
il tipo e l'origine delle cellule utilizzate per la preparazione
del vaccino;
la concentrazione minima di virus;
l'avvertimento che il contatto tra il vaccino e il disinfettante
deve essere evitato;
il periodo entro il quale il vaccino puo' essere utilizzato dopo la
ricostituzione;
l'avvertimento che il vaccino non puo' essere somministrato alle
donne in stato di gravidanza.
4. Documentazione da inviare all'Istituto superiore di sanita'.
4.1. Copia della domanda di cui al punto 5.1.
4.2. Copie dei protocolli di tutte le operazioni di produzione e
dei controlli effettuati sulla serie. Nella documentazione,
debitamente firmata dal direttore tecnico responsabile, devono essere
altresi' precisate, in occasione del controllo di Stato della
semenza, la storia e le caratteristiche del ceppo usato e il numero
di passaggi cui il ceppo originale e' stato sottoposto per la
preparazione della semenza.
4.3. Copia del verbale di prelevamento dei campioni. Nel verbale,
munito delle firme del direttore tecnico e del medico capo della
struttura sanitaria o di un incaricato, alla presenza del quale viene
eseguito il prelevamento dei campioni, secondo le norme previste
dall'art. 15 del regio decreto 18 giugno 1905, n. 407, devono
figurare, fra gli altri dati, il numero di serie, il numero
complessivo delle dosi costituenti la partita, la data di
preparazione della partita e il numero delle dosi costituenti il
campione destinato all'Istituto superiore di sanita'.
4.4. Se trattasi di vaccino di provenienza estera, i protocolli
relativi alla produzione ed ai controlli effettuati, devono essere
vistati dall'autorita' sanitaria del Paese di origine del vaccino ed
accompagnati da una dichiarazione giurata attestante che il vaccino
giunto in dogana, debitamente contrassegnato da un numero progressivo
di serie, proviene tutto da un'unica partita. Tutti i documenti
devono esser vistati da console italiano per la circoscrizione ove si
produce il vaccino.
4.5. Quietanza comprovante il versamento a favore dell'Istituto
superiore di Sanita', presso la sezione di tesoreria provinciale,
della somma di L. 20.000.000 per la semenza virale; L. 5.000.000 per
ogni serie di sospensione madre; L. 1.500.000 per ogni lotto di
prodotto finito; L. 800.000 per la convalida del titolo virale.
4.6. I campioni da inviare all'Istituto superiore di sanita'
dovranno essere: 200 ml di sospensione virale non diluita prima della
chiarificazione, 100 fiale del prodotto finito con relativo liquido
per la ricostituzione.
5. Documentazione da inviare al Ministero della sanita', direzione
generale servizio farmaceutico.
5.1. Domanda in carta legale con la quale viene richiesto che il
vaccino sia sottoposto a controllo di Stato, nella quale sia
precisato il numero di serie e di partita del vaccino. Tale domanda,
indirizzata al Ministero della sanita', dovra' essere presentata agli
assessorati alla sanita', regionali delle province autonome di Trento
e Bolzano, tramite le unita' sanitarie locali, ove funzionanti. Per
la regione Sicilia la domanda dovra' essere presentata agli uffici
dei medici provinciali.
5.2. Eventuale copia del verbale di prelevamento dei campioni di
cui al punto 4.3.
6. Vaccino sottoposto a controllo di Stato con esito favorevole.
In base al risultato favorevole del controllo, comunicato
dall'Istituto superiore di sanita' al Ministero della sanita' ed
all'autorita' sanitaria competente per territorio, quest'ultima
provvedera' allo svincolo della serie per la distribuzione giusta le
norme dell'art. 16 e seguenti del regio decreto 18 giugno 1905, n.
407.