METODO 22
DETERMINAZIONE DEL FOSFORO ORGANICO
1. Oggetto e campo di applicazione
Descrizione di un metodo per la determinazione del fosforo organico.
Il metodo e' applicabile a tutti i tipi di suolo.
2. Principio
Il metodo consiste nell'estrazione con acido cloridrico concentrato
di due porzioni omogenee e corrispondenti allo stesso campione di
terreno: la prima trattata e la seconda non trattata a 240 C.
Sugli estratti si misura il contenuto di fosforo inorganico e la
differenza di contenuto fra il campione trattato termicamente e
quello non trattato rappresenta il tenore di fosforo organico nel
terreno.
3. Reagenti
Nel corso dell'analisi utilizzare acqua distillata o di purezza
equivalente e reagenti di qualita' analitica riconosciuta.
3.1. Acido cloridrico, HCl, concentrato (rho = 1,186).
3.2. Acido cloridrico, HCl, soluzione 0,5 mol/l: diluire 43 ml di HCl
concentrato (3.1) in matraccio tarato da 1000 ml con acqua fino a
volume.
3.3. Ammonio idrossido, NH4OH, soluzione 6 mol/l: diluire 385 ml di
ammoniaca concentrata (rho = 0,89) con acqua in un matraccio tarato
da 1000 ml.
3.4. Para-nitrofenolo, 4-O2NC6H4OH, soluzione 5 g/l: sciogliere in
acqua 0,500 g di p-nitrofenolo in matraccio da 100 ml e portare a
volume con acqua.
3.5. Ammonio p-molibdato, (NH4)6Mo7O24 per 4H2O, soluzione 10 g/l:
sciogliere, in matraccio tarato da 1000 ml, 10 g di ammonio molibdato
e 0,50 g di potassio antimoniltartrato, K(SbO)C4H4O6 per 1/2H2O, in
circa 500 ml di acqua. Aggiungere quindi con cautela 125 ml di acido
solforico concentrato (rho = 1,84) e portare a volume con acqua.
3.6. Reattivo molibdico: sciogliere 1,5 g di acido ascorbico, C6H8O6,
in 100 ml di soluzione di molibdato (3.5). Questa soluzione va
preparata giornalmente.
3.7. Fosforo, soluzione standard madre a 200 mg/l di P: pesare 1,1493
g di KH2PO4 essiccato a 105 C, porli in un matraccio tarato da 1000
ml e portare a volume con acqua.
3.8. Fosforo, soluzione standard a 4 mg/l di P: prelevare 20 ml della
soluzione 3.7 e portare a volume con acqua, in un matraccio tarato da
1000 ml.
3.9. Fosforo, soluzioni standard per eseguire la curva di taratura:
prelevare dalla soluzione 3.8, con una buretta di precisione 1/20
rispettivamente 2,5, 5, 7,5, 10 e 12,5 ml e portare a volume con
acqua, in matracci tarati classe A da 50 ml. Si ottengono nell'ordine
soluzioni standard a 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, e 1,0 mg/l di P.
4. Apparecchiatura
Corrente attrezzatura da laboratorio e in particolare:
4.1. Capsule in porcellana.
4.2. Spettrofotometro vis.
4.3. Centrifuga con tubi da 50 ml.
4.4. Muffola.
5. Procedimento
5.1. Preparazione del campione per l'analisi
Preparare il campione come descritto nel metodo 2, setacciato a 0,5
mm.
5.2. Presa del campione
5.2.1. Pesare 0,500 g di campione e porli in una piccola capsula di
porcellana.
5.2.2. Pesare 0,500 g di campione e porli in un tubo da centrifuga.
5.3. Preparazione della soluzione per la colorimetria
5.3.1. Riporre la capsula con il terreno per un'ora in muffola
preriscaldata a 240 C avendo l'accortezza di disporre sul piano
della muffola una sottile lamina di amianto.
5.3.2. Dopo raffreddamento trasferire quantitativamente il campione
in tubo da centrifuga da 50 ml.
5.3.3. Alle due frazioni di campione (5.2.1., trattato termicamente,
e 5.2.2, non trattato) aggiungere 5 ml di acido cloridrico
concentrato (3.1). Scaldare il tutto per 10 minuti in bagno
termostatico a 70 C.
5.3.4. Aggiungere una ulteriore aliquota di 5 ml di acido cloridrico
concentrato (3.1) e lasciar reagire per un'ora a temperatura
ambiente. Evitare di lasciare a riposo per lungo tempo l'estratto
cloridrico del campione non trattato termicamente per evitare la
possibile graduale idrolisi dei fosfati organici.
5.3.5. Aggiungere 25 ml di acqua, agitare, centrifugare e travasare
la soluzione limpida in matraccio tarato da 100 ml, lavare il residuo
una volta aggiungendo le acque di lavaggio alla soluzione e portare a
volume con acqua.
5.3.6. Trasferire da 2 a 10 ml di soluzione (in funzione del
contenuto in fosforo) in matraccio tarato da 50 ml, aggiungere 2
gocce di soluzione di para-nitrofenolo (3.4) ed aggiungere ammonio
idrossido (3.3) fino a neutralita' (comparsa del colore giallo).
5.4. Colorimetria
Ripristinare condizioni acide (scomparsa del colore giallo) mediante
aggiunta di acido cloridrico (3.2), diluire con acqua e aggiungere 5
ml di reattivo molibdico (3.6). Portare a volume, agitare, lasciare a
riposo per 15 minuti e leggere allo spettrofotometro a lunghezza
d'onda di 700 nm in cuvetta da 20 mm di cammino ottico.
5.5. Curva di taratura
5.5.1. Preparare la curva di taratura sottoponendo alla stessa
procedura di cui al punto 5.4 10 ml di ciascuna soluzione preparata
come al punto 3.9.
5.5.2. Costruire la curva di taratura mettendo in ordinata
l'estinzione ed in ascissa le concentrazioni di fosforo.
6. Espressione dei risultati
6.1. Il contenuto in fosforo organico si esprime in mg/kg, senza
cifre decimali.
6.2. Effettuare i calcoli utilizzando la seguente espressione:
B per D per V
C = 1000 per -----------------
P
dove:
C e' il fosforo contenuto nel terreno, espresso in mg/kg;
B e' la concentrazione di fosforo ricavato dalla curva di taratura,
espresso in mg/l;
D e' il fattore di diluizione;
V e' il volume, espresso in litri (0,1);
P e' la massa del terreno sottoposto ad analisi, in grammi.
6.3. I valori di fosforo organico saranno ricavati per differenza:
Po = Pt - Pn
dove:
Po e' il fosforo organico;
Pt e' il fosforo nel campione trattato termicamente (5.2.1);
Pn e' il fosforo nel campione non trattato termicamente (5.2.2);
6.4. Per esprimere il risultato in P2O5 moltiplicare il valore
trovato per il fattore 2,2914.