Allegato 2
PREPARAZIONE DEGLI EMOCOMPONENTI E LORO CONSERVAZIONE
Emazie concentrate.
Le emazie concentrate senza ulteriori soluzioni additive, sono
ottenute da sangue intero attraverso la rimozione di parte del plasma
mediante centrifugazione.
Alla fine della procedura ciascuna unita' deve possedere:
contenuto minimo di emoglobina pari a 45 g;
ematocrito compreso tra 65 e 75%.
Le emazie concentrate, preparate senza interruzione del circuito
chiuso, possono essere conservate a 4 oC (+ o -) 2 oC per un periodo
di tempo analogo a quello del sangue intero.
Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive.
Le emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive sono
ottenute da sangue intero, dopo centrifugazione e rimozione del
plasma e successiva aggiunta al concentrato eritrocitario di
appropriate soluzioni nutritive.
L'ematocrito del preparato ottenuto, che dipende dalla metodica
di centrifugazione impiegata, dalla quantita' di plasma rimosso;
dalle caratteristiche della soluzione additiva, non deve essere
superiore al 70%; ogni unita' deve avere un contenuto minimo di
emoglobina pari a 45 g.
L'unita' preparata deve possedere l'intero patrimonio
eritrocitario dell'unita' di partenza e deve contenere, sempreche'
non siano stati rimossi, la maggior parte dei leucociti e piastrine,
in funzione del metodo di centrifugazione impiegato.
La durata del periodo di conservazione del preparato e' in
rapporto alla soluzione additiva impiegata.
Emazie concentrate private del buffy-coat.
Le emazie concentrate private del buffy-coat sono ottenute da
sangue intero con la rimozione di parte del plasma e dello strato
leucopiastrinico (buffy-coat).
L'unita' preparata deve contenere tutti gli eritrociti di
partenza meno una quota non superiore al 10%.
Ad un controllo di qualita' a campione il contenuto di leucociti
e di piastrine deve essere inferiore rispettivamente a 1,2 x
10(elevato a 9), e a 20 x 10(elevato a 9) per unita', quello di
emoglobina non inferiore a 43 g.
La durata del periodo di conservazione del preparato e' analoga a
quella indicata per le emazie concentrate.
Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni
additive.
Le emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in
soluzioni additive sono ottenute da sangue intero centrifugato, dopo
rimozione del plasma e del buffy-coat e successiva addizione al
concentrato eritrocitario di opportune soluzioni nutritive.
L'ematocrito del preparato e' in diretto rapporto con il metodo
di centrifugazione adottato, con il volume di plasma rimosso, con il
volume e le caratteristiche della soluzione additiva impiegata.
Ad un controllo di qualita' a campione, alla fine della procedura
di preparazione ogni unita' deve possedere almeno 43 g di emoglobina.
L'unita' preparata deve contenere tutti gli eritrociti di
partenza, meno una quota non superiore al 10%; il contenuto medio di
leucociti e di piastrine per unita' deve essere inferiore
rispettivamente a 1,2 x 10(elevato a 9), e a 20 x 10(elevato a 9).
La durata del periodo di conservazione del preparato e' in
rapporto alla soluzione impiegata.
Emazie lavate.
Le emazie lavate sono ottenute da sangue intero mediante
centrifugazione, rimozione del plasma e successivo lavaggio delle
emazie in soluzione isotonica.
La quantita' di plasma residuo e' in diretto rapporto con il
protocollo di lavaggio impiegato. L'ematocrito varia in funzione
delle necessita' cliniche. Alla fine del procedimento di lavaggio
ciascuna unita' deve possedere un contenuto minimo di emoglobina pari
a 40 g.
Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di proteine
deve essere inferiore a 0,5 g/unita'.
Il preparato deve essere conservato a 4 oC (+ o -) 2 oC per un
periodo di tempo il piu' breve possibile e comunque non superiore a
ventiquattro ore.
Emazie leucodeplete.
Le emazie leucodeplete sono ottenute attraverso la rimozione,
mediante filtrazione, della maggior parte dei leucociti da una
preparazione di emazie o, al momento del prelievo, mediante filtro in
linea. Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di
leucociti deve essere inferiore a 1 x 10(elevato a 6) per unita'.
Ciascuna unita' deve possedere un contenuto minimo di emoglobina pari
a 40 g.
Se la preparazione del prodotto ha comportato l'apertura del
sistema, il tempo di conservazione deve essere inferiore a
ventiquattro ore a 4 oC (+ o -) 2 oC.
Emazie congelate.
Le emazie congelate sono ottenute per congelamento con idoneo
crioprotettivo entro sette giorni dalla raccolta e conservate a -80
oC in congelatore meccanico, o a temperature inferiori in azoto
liquido e in tal caso possono essere conservate fino a dieci anni e
il loro impiego a scopo trasfusionale e' condizionato ai criteri di
idoneita' previsti dalla normativa in vigore.
Prima dell'uso le emazie sono scongelate, lavate, risospese in
soluzione fisiologica e utilizzate nel piu' breve tempo possibile;
possono essere conservate a 4 oC (+ o -) 2 oC per non piu' di
ventiquattro ore.
L'unita' ricostituita di emazie congelate e' praticamente priva
di proteine, granulociti e piastrine. Ogni unita' deve possedere un
contenuto emoglobinico non inferiore a 36 g.
Il trasporto del preparato allo stato congelato richiede misure
atte a mantenere adeguate condizioni di conservazione.
Concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero.
Il concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero e'
ottenuto da sangue intero fresco attraverso centrifugazione e
successivo recupero della maggior parte del contenuto in piastrine.
Ad un controllo di qualita' a campione deve contenere, nel 75%
delle unita' esaminate, almeno 6 x 10(elevato a 10) piastrine in
adeguato volume del mezzo di sospensione.
Il preparato deve possedere un contenuto di leucociti inferiore a
0,2 x 10(elevato a 9) per singola unita' e di eritrociti compreso fra
0,2 e 1 x 10(elevato a 9), sempreche' non siano state adottate misure
volte a diminuire il contenuto dei componenti predetti.
Il concentrato piastrinico da singola unita' di sangue intero,
qualora preparato in sistema chiuso, puo' essere conservato a 22 oC
(+ o -) 2 oC, in agitazione continua, per un periodo di tempo
variabile in funzione del contenitore impiegato e comunque non oltre
cinque giorni dal prelievo. Il volume di plasma o di liquido
conservante deve essere in quantita' tale da garantire, durante tutto
il periodo di conservazione, un pH compreso fra 6,5 e 7,4.
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat.
Il concentrato piastrinico da pool di buffy-coat e' ottenuto da
un pool di 4-8 buffy-coat da singole unita' di sangue intero fresco e
deve contenere almeno 2,5 x 10(elevato a 11) piastrine.
La miscela di buffy-coat deve essere quindi diluita con una
adeguata quantita' di plasma o con appropriata soluzione cristalloide
e centrifugata in modo da ridurre il contenuto di leucociti ad una
quantita' inferiore a 0,05 x 10(elevato a 9) per singola unita' di
partenza.
Il valore di pH e la temperatura di conservazione sono quelli
previsti per i concentrati piastrinici.
La durata del periodo di conservazione dipende dal contenitore
impiegato.
Concentrato piastrinico da aferesi.
Il concentrato piastrinico da aferesi e' ottenuto da un singolo
donatore sottoposto a piastrinoaferesi utilizzando un separatore
cellulare.
Ad un controllo di qualita' a campione il contenuto di piastrine
del concentrato non deve essere inferiore a 3 x 10(elevato a 11)
piastrine in almeno il 75% dei campioni.
Il concentrato ottenuto da plasmapiastrinoaferesi o da prelievo
multicomponente deve contenere almeno 2 x 10(elevato a 11) piastrine.
L'emocomponente, se preparato in sistema chiuso, puo' essere
conservato a 22 oC (+ o -) 2 oC in agitazione continua per un periodo
di tempo variabile in funzione del contenitore impiegato, e comunque
non superiore a cinque giorni dal prelievo.
Il volume di plasma o di liquido conservante deve essere in
quantita' tale da garantire, durante tutto il periodo di
conservazione, un pH compreso fra 6,5 e 7,4.
Piastrine crioconservate (da aferesi).
Le piastrine crioconservate (da aferesi) sono preparate
congelando a -80 oC, o a temperature inferiori, un concentrato di
piastrine prelevate in aferesi da non piu' di ventiquattro ore.
Il preparato puo' essere conservato in congelatore meccanico a
-80 oC fino ad un anno, in vapori di azoto liquido a -150 oC, fino a
dieci anni. E' necessario utilizzare un crioprotettivo.
Prima dell'uso le piastrine devono essere scongelate e risospese
in appropriata soluzione.
Una unita' ricostituita di piastrine crioconservate deve avere:
volume da 50 a 200 ml, conta piastrinica maggiore del 40% del
contenuto piastrinico prima del congelamento, leucociti residui
inferiori a 0,2 x 10(elevato a 6) ogni 0,6 x 10(elevato a 11)
piastrine.
Per il trasporto allo stato congelato devono essere adottate
misure volte a mantenere adeguate condizioni di conservazione.
Concentrato granulocitario da aferesi.
Il concentrato granulocitario da aferesi e' ottenuto da un
singolo donatore mediante l'impiego di separatori cellulari.
Al controllo di qualita' il preparato deve contenere almeno 1 x
10(elevato a 10) granulociti in un volume inferiore a 500 ml in
almeno il 75% delle unita' esaminate.
La preparazione deve essere trasfusa quanto prima possibile e
comunque entro dodici ore se mantenuta a 22 oC (+ o -) 2 oC.
Cellule staminali emopoietiche periferiche.
Le cellule staminali da sangue periferico vengono raccolte come
cellule mononucleate mediante leucoaferesi.
Le cellule staminali da cordone ombelicale vengono raccolte dalla
placenta attraverso le vene del cordone ombelicale.
Quando indicate, successive addizionali purificazioni e
manipolazioni possono comprendere: la rimozione di granulociti ed
eritrociti nonche' la riduzione ed eliminazione di cellule
neoplastiche nelle preparazioni di cellule progenitrici
ematopoietiche autologhe o del numero dei T-linfociti nelle
preparazioni di cellule progenitrici ematopoietiche allogeniche, al
fine di minimizzare la Graft versus Host Disease (GvHD).
Le cellule raccolte vengono sospese in una soluzione contenente
un crioprotettivo e proteine, congelate in idonei contenitori e poi
conservate a temperature inferiori a -80 oC.
Le cellule progenitrici ematopoietiche congelate debbono essere
scongelate in bagno termostatico a +37 oC, sotto agitazione continua,
e trasfuse immediatamente.
Debbono essere congelati anche i campioni di riferimento delle
preparazioni di cellule progenitrici ematopoietiche per i dovuti
controlli.
Plasma fresco congelato.
Il plasma fresco congelato (P.F.C.) e' ottenuto attraverso il
congelamento di plasma, da singolo donatore di sangue intero o in
aferesi (plasmaferesi), che deve avvenire entro limiti di tempo e a
temperature tali da preservare adeguatamente i fattori labili della
coagulazione.
Qualora il plasma sia ottenuto da sangue intero deve essere
separato entro sei ore dalla raccolta ed il suo congelamento deve
avvenire in una apparecchiatura che lo determini completo entro
un'ora.
Ad un controllo di qualita' a campione, il preparato deve
contenere almeno il 70% del contenuto originale di fattore VIII.
Il plasma fresco congelato, se mantenuto costantemente a
temperatura inferiore a -40 oC, puo' essere conservato per un periodo
di ventiquattro mesi, se a -30 oC, puo' essere conservato per dodici
mesi, tra -25 oC e -30 oC per sei mesi, tra -18 oC e -25 oC per tre
mesi. Trascorsi i periodi anzidetti il preparato e' utilizzabile solo
per la produzione di frazioni plasmatiche.
Lo scongelamento del PFC deve avvenire a temperatura compresa tra
30 oC e 37 oC in bagno con agitazione o con altra strumentazione
idonea, tale da consentire il controllo della temperatura; dopo lo
scongelamento deve essere usato il piu' presto possibile e comunque
non oltre ventiquattro ore se conservato a 4 (+ o -) 2 oC e non puo'
essere ricongelato.
In rapporto all'eventuale applicazione di trattamenti virucidi
possono essere accettate caratteristiche finali del prodotto diverse
purche' in accordo con i criteri internazionalmente riconosciuti
validi.
Crioprecipitato e plasma privo di crioprecipitato.
Il crioprecipitato e' un preparato costituito dalla frazione
crioglobulinica del plasma fresco, ottenuta da una singola donazione,
concentrato ad un volume finale di 10-20 ml. Il prodotto contiene,
oltre al fattore VIII, anche la maggior parte del fattore Von
Willebrand, del fibrinogeno, del fattore XIII e della fibronectina,
presenti nel plasma fresco di partenza.
Ad un controllo di qualita' a campione, il contenuto di fattore
VIII deve essere almeno pari al 70%.
Il plasma privo di crioprecipitato e' costituito da plasma fresco
congelato dopo rimozione del crioprecipitato.
Le condizioni di conservazione sono quelle del PFC. Lo
scongelamento immediatamente prima dell'uso deve seguire le modalita'
indicate per il plasma fresco congelato.
Emocomponenti irradiati.
Le unita' di sangue ed emocomponenti, nel caso sia indicata
l'irradiazione, devono essere sottoposte a una dose di radiazioni
compresa tra 2.500 cGy e 4.000 cGy, allo scopo di ridurre il rischio
di GvHD post-trasfusionale.
L'irradiazione delle emazie deve avvenire entro quattordici
giorni dal prelievo e le unita' irradiate debbono essere trasfuse
entro ventotto giorni dal prelievo.
Nei casi di trasfusione intrauterina, o a neonato, o a paziente
con iperpotassiemia e' necessario procedere alla trasfusione entro
quarantotto ore dall'irradiazione, oppure provvedere
all'eliminazione, con mezzi idonei, dell'eccesso di potassio.
L'irradiazione non modifica la scadenza dei concentrati
piastrinici.
Le unita' di sangue ed emocomponenti irradiate possono essere
assegnate anche a pazienti immunologicamente normali, fatte salve le
dovute precauzioni per categorie a rischio di iperpotassiemia.
La irradiazione degli emocomponenti deve avvenire in locali
conformi alle norme di sicurezza.
Unita' di predeposito per autotrasfusione.
L'unita' di predeposito per autotrasfusione consiste in una
unita' di sangue intero e/o di emocomponenti prelevata al paziente
cui e' destinata per corrispondere a proprie esigenze terapeutiche.
Il preparato e' di esclusivo uso autologo pertanto non e'
soggetto ai vincoli imposti dai protocolli per l'accertamento della
idoneita' del donatore di sangue.
Il responsabile della struttura trasfusionale adotta il
protocollo per la procedura operativa del predeposito in cui viene
definita anche la modalita' di acquisizione del consenso informato
del paziente.
Piu' unita' di sangue intero e/o di emocomponenti, in funzione
delle esigenze terapeutiche, possono essere prelevate dal paziente a
brevi intervalli di tempo, secondo le procedure adottate nella
struttura trasfusionale e con l'eventuale supporto farmacologico, e
predepositate.
L'unita' di predeposito deve essere identificata in maniera
univoca, sulla etichetta della relativa sacca deve essere apposta la
firma del paziente e del medico responsabile del prelievo.
Il paziente deve essere informato che le unita' predepositate
sono conservate fino a scadenza della componente eritrocitaria e che
sono disponibili per le sue necessita' trasfusionali.
La scadenza dell'unita' di predeposito, le relative modalita' di
conservazione e di trasporto sono analoghe a quelle per le unita'
omologhe.